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氨基酸分析儀的操作方法

2025
06-12

14:26:23

分享:
82
來源:大連依利特分析儀器有限公司
氨基酸分析儀,是指用于測(cè)定蛋白質(zhì)、肽及其他藥物制劑的氨基酸組成或含量的方法。進(jìn)行氨基酸分析前,必須將蛋白質(zhì)及肽水解成單個(gè)氨基酸。它是基于陽離子交換柱分離、柱后茚三酮衍生、光度法測(cè)定的離子交換色譜儀。氨基酸分析儀由色譜柱、自動(dòng)進(jìn)樣器、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)記錄和處理系統(tǒng)組成。氨基酸分析儀的基本原理為流動(dòng)相(緩沖溶液)推動(dòng)氨基酸混合物流經(jīng)裝有陽離子交換樹脂的色譜柱,各氨基酸與樹脂中的交換基團(tuán)進(jìn)行離子交換,當(dāng)用不同的pH緩沖溶液進(jìn)行洗脫時(shí)因交換能力的不同而將氨基酸混合物分離,分離出的單個(gè)氨基酸組分與茚三酮試劑反應(yīng),生成紫色化合物或黃色化合物,用可見光檢測(cè)器檢測(cè)其在570 nm、440 nm的吸光度。這些有色產(chǎn)物對(duì)應(yīng)的吸收強(qiáng)度與洗脫出來的各氨基酸濃度之間的關(guān)系符合朗伯-比爾定律。據(jù)此,可對(duì)氨基酸各組分進(jìn)行定性、定量分析。氨基酸分析儀也可利用陰離子交換分離后經(jīng)積分脈沖安培法檢測(cè),該檢測(cè)方法無需將待測(cè)氨基酸進(jìn)行柱前或柱后衍生。
  操作方法:
  樣品處理
  對(duì)樣品中各種游離氨基酸含量進(jìn)行測(cè)定,能夠?qū)⒅倦s質(zhì)除去,直接上柱進(jìn)行分析。
  必須先經(jīng)過酸水解才能夠?qū)Φ鞍踪|(zhì)的氨基酸組成進(jìn)行測(cè)定,上柱分析之前,必須使蛋白質(zhì)變成氨基酸。
  樣品分析
  經(jīng)過處理后的樣品上柱進(jìn)行分析。按照所用自動(dòng)分析儀的靈敏度來確定上柱的樣品量。通常是每種氨基酸大約0.1μmol(水解樣品干重大約為0.3mg)。必須在pH5~5.5、100攝氏度下進(jìn)行測(cè)定,10~15分鐘為反應(yīng)進(jìn)行的時(shí)間。在570nm 波長(zhǎng)下進(jìn)行生成的紫色物質(zhì)的比色測(cè)定。在440nm 波長(zhǎng)下進(jìn)行生成的黃色化合物的比色測(cè)定。一個(gè)氨基酸全分析通常僅要大約一個(gè)小時(shí),可以同時(shí)往儀器中裝入幾十個(gè)樣品,按照順序自動(dòng)分析,Z后數(shù)據(jù)會(huì)自動(dòng)計(jì)算給出,非常精確。±1~3%為儀器的精度。
  結(jié)果計(jì)算
  各種氨基酸的定量結(jié)果可以通過帶有數(shù)據(jù)處理機(jī)的儀器自動(dòng)打印出來,不然,能夠用尺子測(cè)量峰高或用峰高乘以半峰寬確定峰面積來將氨基酸的精確含量計(jì)算出來。除此以外,氨基酸的種類能夠根據(jù)峰出現(xiàn)的時(shí)間進(jìn)行確定。
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