人ELISA試劑盒使用注意事項:試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡半個小時分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)木數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
人ELISA試劑盒的實驗操作步驟:
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:在小試管中進行稀釋。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣,待測樣品孔中先加樣品稀釋液,然后再加待測樣品。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置室溫溫育半個小時左右。
4.配液:將濃縮洗滌液用蒸鐳水稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置后棄去,如此重復(fù)幾次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑,空白孔除外。
7.再按照上述步驟進行一次溫育和洗滌。
8.顯色:每孔先加入顯色劑,輕輕震蕩混勻,室溫避光顯色十五分鐘。
9.終止:每孔加終止液,終止反應(yīng)。
10.測定:以空白空調(diào)零,依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
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