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氨基酸分析儀的操作方法

閱讀：227發(fā)布時間：2025-6-12

氨基酸分析儀，是指用于測定蛋白質(zhì)、肽及其他藥物制劑的氨基酸組成或含量的方法。進(jìn)行氨基酸分析前，必須將蛋白質(zhì)及肽水解成單個氨基酸。它是基于陽離子交換柱分離、柱后茚三酮衍生、光度法測定的離子交換色譜儀。氨基酸分析儀由色譜柱、自動進(jìn)樣器、檢測器、數(shù)據(jù)記錄和處理系統(tǒng)組成。氨基酸分析儀的基本原理為流動相（緩沖溶液）推動氨基酸混合物流經(jīng)裝有陽離子交換樹脂的色譜柱，各氨基酸與樹脂中的交換基團(tuán)進(jìn)行離子交換，當(dāng)用不同的pH緩沖溶液進(jìn)行洗脫時因交換能力的不同而將氨基酸混合物分離，分離出的單個氨基酸組分與茚三酮試劑反應(yīng)，生成紫色化合物或黃色化合物，用可見光檢測器檢測其在570 nm、440 nm的吸光度。這些有色產(chǎn)物對應(yīng)的吸收強(qiáng)度與洗脫出來的各氨基酸濃度之間的關(guān)系符合朗伯-比爾定律。據(jù)此，可對氨基酸各組分進(jìn)行定性、定量分析。氨基酸分析儀也可利用陰離子交換分離后經(jīng)積分脈沖安培法檢測，該檢測方法無需將待測氨基酸進(jìn)行柱前或柱后衍生。
　　操作方法：
　　樣品處理
　　對樣品中各種游離氨基酸含量進(jìn)行測定，能夠?qū)⒅倦s質(zhì)除去，直接上柱進(jìn)行分析。
　　必須先經(jīng)過酸水解才能夠?qū)Φ鞍踪|(zhì)的氨基酸組成進(jìn)行測定，上柱分析之前，必須使蛋白質(zhì)變成氨基酸。
　　樣品分析
　　經(jīng)過處理后的樣品上柱進(jìn)行分析。按照所用自動分析儀的靈敏度來確定上柱的樣品量。通常是每種氨基酸大約0.1μmol（水解樣品干重大約為0.3mg）。必須在pH5～5.5、100攝氏度下進(jìn)行測定，10～15分鐘為反應(yīng)進(jìn)行的時間。在570nm 波長下進(jìn)行生成的紫色物質(zhì)的比色測定。在440nm 波長下進(jìn)行生成的黃色化合物的比色測定。一個氨基酸全分析通常僅要大約一個小時，可以同時往儀器中裝入幾十個樣品，按照順序自動分析，Z后數(shù)據(jù)會自動計算給出，非常精確。±1～3%為儀器的精度。
　　結(jié)果計算
　　各種氨基酸的定量結(jié)果可以通過帶有數(shù)據(jù)處理機(jī)的儀器自動打印出來，不然，能夠用尺子測量峰高或用峰高乘以半峰寬確定峰面積來將氨基酸的精確含量計算出來。除此以外，氨基酸的種類能夠根據(jù)峰出現(xiàn)的時間進(jìn)行確定。

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