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技術(shù)文章

高效液相色譜儀通常操作使用步驟和使用常見問題

閱讀：35發(fā)布時間：2025-6-12

高效液相色譜儀(HPLC)是應(yīng)用高效液相色譜原理，主要用于分析高沸點不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機化合物的儀器設(shè)備。它由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。HPLC廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、食品科學(xué)、藥物研究以及環(huán)境研究中。
　　高效液相色譜儀通常操作使用步驟和使用常見問題：
　　1.開機按溶劑上的power鍵，待自檢完畢后開始進(jìn)行操作。
　　2.排氣
　　逆時針旋轉(zhuǎn)排氣閥（不可超過180°）,打開排氣閥，按purge鍵排氣泡，在此期間流動相連續(xù)流出并且無氣泡；按purge鍵，泵停止，將排液閥旋鈕順時針方向旋轉(zhuǎn)到底，關(guān)閉排液閥
　　3.沖流動相
　　按Pump鍵，泵啟動，觀察屏幕上壓力顯示，壓力上升平穩(wěn)后，繼續(xù)按上述方法升高流速，使流速上升到實驗需要的流速。
　　4.進(jìn)樣
　　打開檢測器，調(diào)節(jié)波長為實驗需要的波長；打開工作站，查看基線，待基線走平后，進(jìn)樣。
　　5.使用后維護(hù)
　　6.水或含水甲醇溶液沖洗
　　6.1 水或含水甲醇溶液沖洗
　　使用結(jié)束后，將流速降到0.1 ml/min，按Pump鍵，泵停止。換下流動相，換上已抽濾并超聲過的純凈水或含水甲醇溶液。按Pump鍵，泵啟動，觀察屏幕上壓力顯示，壓力上升平穩(wěn)后，繼續(xù)按上述方法升高流速。如流動相含有無機鹽，必須保證足夠的沖洗時間。
　　6.2甲醇溶液沖洗
　　換上已抽濾并超聲過的甲醇溶液，按3.1的操作進(jìn)行封柱處理。
　　7 關(guān)機
　　按Pump鍵，關(guān)閉泵；關(guān)閉桌面在線工作站；按Power鍵關(guān)閉LC-10ATvp。
　　8.注意事項
　　8.1 不能使用濃硫酸、濃硝酸、二、丙酮、二氯甲烷、氯仿、二甲基亞砜等作為流動相。
　　8.2 流動相溶劑選擇H
　　8.3 流動相溶劑必須進(jìn)行脫氣。若不脫氣則在溶劑混合時或壓力、溫度變化時容易產(chǎn)生氣泡，會引起泵的誤動作和生產(chǎn)檢測器信號噪音。
　　8.4 以硅膠作載體的化學(xué)鍵合填充劑的穩(wěn)定性受流動相pH值的影響，使用時應(yīng)詳細(xì)閱讀該柱的說明書，在規(guī)定的pH值范圍內(nèi)使用。使用時，可在泵與進(jìn)樣器之間連接一硅膠柱，以保護(hù)分析柱。當(dāng)使用高PH或含鹽的流動相時，盡可能縮短使用時間，用后立即沖洗。
　　8.5 分析結(jié)束后，從色譜流路系統(tǒng)，泵、進(jìn)樣器、色譜柱至檢測器流通池，均應(yīng)充分沖洗，特別是含鹽的流動相，更應(yīng)注意先用水、再用含水甲醇溶液充分沖洗。如發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重故障，應(yīng)與廠家聯(lián)系維修。
　　8.6 請在使用前充分閱讀作業(yè)指導(dǎo)書，不得擅自拆卸儀器的零部件。

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